Yangi Koronavirus (SARS-Cov-2) Nuklein kislotasini aniqlash to'plami
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurudascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Yangi Koronavirus (SARS-Cov-2) Nuklein kislotasini aniqlash to'plami (Fluoresan RT-PCR prob usuli)
【Packaging specifications 】25 test/to'plam
【Intended usyoshi】
Ushbu to'plam nazofarengeal tamponlarda, orofaringeal (tomoq) tamponlar, burun burunlari, o'rta turbinalar, burunni yuvish va burun aspiratlarida yangi koronavirusdan nuklein kislotani sifatli aniqlash uchun ishlatiladi. Yangi koronavirusning ORF1ab va N genlarini aniqlash yangi koronavirus infektsiyasining yordamchi diagnostikasi va epidemiologik monitoringi uchun ishlatilishi mumkin.
【Principles of the prosedure 】
Ushbu to'plam maxsus TaqMan problari va yangi koronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab va N gen ketma-ketliklari uchun mo'ljallangan maxsus primerlar uchun mo'ljallangan. PCR reaktsiyasi eritmasi maqsadlarni aniq aniqlash uchun maxsus primerlar va lyuminestsent zondlarning 3 to'plamini o'z ichiga oladi va qo'shimcha maxsus primerlar va lyuminestsent zondlar to'plami endogen uy xo'jaligi genlarini aniqlash uchun to'plamning ichki standart nazorati sifatida ishlatiladi.
Sinov printsipi shundan iboratki, o'ziga xos lyuminestsent prob PCR reaktsiyasida Taq fermentining ekzonukleaza faolligi bilan hazm qilinadi va parchalanadi, shuning uchun muxbir floresan guruhi va söndürülmüş floresan guruhi ajratiladi, shuning uchun floresan monitoring tizimi floresanni qabul qilishi mumkin. signal, so'ngra PCR kuchaytirilishining boyitish effekti orqali probning floresans signali belgilangan chegara qiymatiga - Ct qiymatiga etadi (Tsikl chegarasi). Maqsadli amplikon bo'lmasa, probning reportyor guruhi söndürme guruhiga yaqin. Bu vaqtda flüoresan rezonans energiyasini uzatish sodir bo'ladi va muxbirlar guruhining floresansi söndürme guruhi tomonidan o'chiriladi, shuning uchun floresan signalni lyuminestsent PCR asbobi aniqlab bo'lmaydi.
Sinov paytida reagentlardan foydalanishni nazorat qilish uchun to'plam ijobiy va salbiy nazorat elementlari bilan jihozlangan: musbat nazoratda maqsadli joy rekombinant plazmid, salbiy nazorat esa atrof-muhit ifloslanishini nazorat qilish uchun ishlatiladigan distillangan suvdir. Sinov paytida bir vaqtning o'zida ijobiy va salbiy nazoratni o'rnatish tavsiya etiladi.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Komponentts | |
| Name | Spesifikfiksatsiya | Miqdority | Miqdority | |
| Ijobiy nazorat | 180 mkl/flakon | 1 | 1 | Sun'iy ravishda tuzilgan plazmidlar, Distillangan suv |
| Salbiy nazorat | 180 mkl/flakon | 1 | 1 | Distillangan suv |
| SARS-Cov-2 aralashmasi | 358,5 mkl/flakon | 1 | / | Maxsus primer juftlari, aniq aniqlovchi lyuminestsent zondlar, dNTPlar, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Distillangan suv va boshqalar. |
| Ferment aralashmasi | 16,5 mkl/flakon | 1 | / | Taq fermentlari, teskari transkriptaza, UNG fermentlari va boshqalar. |
| SARS-Cov-2 aralashmasi (liyofillangan) | 25 ta test / flakon | / | 1 | Maxsus primer juftlari, aniq aniqlovchi lyuminestsent zondlar, dNTPlar, Taq fermentlari, teskari transkriptaza, Distillangan suv va boshqalar. |
| 2x bufer | 375 mkl/flakon | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Distillangan suv va boshqalar. |
Eslatma:(1) Turli partiya to'plamlaridagi komponentlarni aralashtirish yoki almashtirish mumkin emas.
(2) O'zingizning reaktivingizni tayyorlang: Nuklein kislotasi ekstraktsiyasi to'plami.
【Storage conditions va expiration date 】
For BST-SARS-25:Uzoq vaqt davomida -20 ± 5 ℃ da tashish va saqlash.
For BST-SARS-DR-25:Xona haroratida tashish. -20±5℃ haroratda uzoq vaqt saqlang.
Qayta-qayta muzlatish-eritish davrlaridan saqlaning. Yaroqlilik muddati taxminiy ravishda 12 oyga belgilangan.
Ishlab chiqarilgan va foydalanish sanasi uchun yorliqni ko'ring.
Birinchi marta ochilgandan so'ng, qayta muzlatish-eritish davrlarini va reagentni muzlatish sonini oldini olish uchun reagentni -20±5 ° C da 1 oydan ko'p bo'lmagan muddatga yoki reagent muddati tugagunga qadar, qaysi sana birinchi bo'lishidan qat'i nazar, saqlanishi mumkin. -erish davrlari 6 martadan oshmasligi kerak.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Qo'llaniladigan namuna turi: ekstraksiya qilingan nuklein kislota eritmasi.
2.Namunani saqlash va tashish: -20±5℃ da 6 oy davomida saqlang. Namunalarni 6 martadan ko'p bo'lmagan muzlatish va eritish.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Virusli nuklein kislotani ajratib olish uchun mos nuklein kislota ekstraktsiyasi to'plamini tanlang va tegishli to'plam ko'rsatmalariga rioya qiling. Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd tomonidan ishlab chiqarilgan nuklein kislotasi ekstraktsiyasi va tozalash to'plami yoki unga tenglashtirilgan nuklein kislotasini tozalash to'plamidan foydalanish tavsiya etiladi.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 aralashmasi va ferment aralashmasini olib tashlang, xona haroratida Vortex qurilmasi bilan yaxshilab eritib oling va keyin qisqa vaqt davomida santrifüj qiling.
(2) 358,5 uL SARS-Cov-2 aralashmasiga 16,5 uL ferment aralashmasi qo'shildi va aralash reaksiya eritmasini olish uchun yaxshilab aralashtirildi.
(3) Toza 0,2 ml PCR oktal naychasini tayyorlang va uni har bir quduqqa 15uL yuqoridagi aralash reaksiya eritmasi bilan belgilang.
(4) 15 mkL tozalangan nuklein kislota eritmasi, musbat nazorat va salbiy nazorat qo'shing va sakkizlik naycha qopqog'ini ehtiyotkorlik bilan yoping.
(5) teskari aylantirib yaxshilab aralashtiramiz va suyuqlikni trubaning pastki qismiga to'plash uchun tez santrifüj qiling.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Reaksiya aralashmasini tayyorlash uchun SARS-Cov-2 aralashmasiga ((Liyofillangan) 375ul 2x bufer qo'shing. Pipetlash orqali yaxshilab aralashtiriladi va keyin qisqa vaqt davomida santrifüj qilinadi. （Reaksiya aralashmasi tayyorlangach, uni -20 ℃ haroratda saqlash tavsiya etiladi. uzoq muddatli saqlash.)
(2) Toza 0,2 ml PCR oktal naychasini tayyorlang va uni har bir quduqqa 15 mL reaktsiya aralashmasi bilan belgilang.
(3) 15 mkL tozalangan nuklein kislota eritmasi, musbat nazorat va salbiy nazorat qo'shing va sakkizlik trubka qopqog'ini ehtiyotkorlik bilan yoping.
(4) teskari aylantirib yaxshilab aralashtiramiz va suyuqlikni trubaning pastki qismiga to'plash uchun tez santrifüj qiling.
3. PCR amplification （Ishlash sozlamalari uchun asboblar qo'llanmasiga qarang.)
3. 1 PCR 8-naychasini lyuminestsent PCR asbobining namunalar kamerasiga joylashtiring va yuklash tartibiga ko'ra sinovdan o'tkaziladigan namunani, ijobiy va salbiy nazoratni o'rnating.
3.2 Flüoresansni aniqlash kanali:
(1) ORF1ab geni FAM ni aniqlash kanalini tanlaydi (Reporter: FAM, Quencher: Yo'q).
(2) N geni VIC ni aniqlash kanalini tanlaydi (Reporter: VIC, Quencher: Yo'q).
(3) Ichki standart gen CY5 ni aniqlash kanalini tanlaydi (Reporter: CY5, Quencher: Yo'q).
(4) Passiv ma'lumotnoma ROX ga o'rnatiladi.
3.3 PCR dasturi parametrlarini sozlash:
| Qadam | Harorat (℃) | Vaqt | Tsikllar soni | |
| 1 | Teskari transkripsiya reaktsiyasi | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Taq fermentini faollashtirish | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Taq fermentini faollashtirish | 93 | 10 s | 43 |
| Tavlangan kengaytma va floresan olish | 55 | 30 s | ||
Sozlagandan so'ng, faylni saqlang va reaktsiya dasturini ishga tushiring.
4.Results analysis
Dastur tugagandan so'ng, natijalar avtomatik ravishda saqlanadi va kuchaytirish egri chizig'i tahlil qilinadi. Kuchaytirish egri chizig'i asbobning standart chegarasiga o'rnatiladi.
【Explanation of test results 】
1. Tajribaning haqiqiyligini aniqlang: musbat nazorat FAM, VIC kanali odatdagi kuchaytirish egri chizig'iga ega bo'lishi kerak va Ct qiymati odatda 34 dan past bo'ladi, lekin turli asboblarning turli chegara sozlamalari tufayli o'zgarishi mumkin. Salbiy nazorat FAM, VIC kanali kuchaytirilmagan Ct bo'lishi kerak. Yuqoridagi talablar bir vaqtning o'zida bajarilishi kerakligiga kelishilgan, aks holda bu test haqiqiy emas.
2. Natijani baholash
| FAM/VIC kanali | Sud natijasi |
| Ct＜37 | Namuna sinovi ijobiy |
| 37≤Ct＜40 | Kuchaytirish egri chizig'i S shaklida bo'lib, shubhali namunalarni qayta tekshirish kerak; agar qayta imtihon natijalari bir xil bo'lsa, u ijobiy, aks holda salbiy deb baholanadi |
| Ct≥40 yoki kuchaytirilmaydi | Namuna testi salbiy (yoki to'plamni aniqlashning pastki chegarasidan past) |
Eslatma: (1) Agar FAM kanali ham, VIC kanali ham bir vaqtning o'zida ijobiy bo'lsa, SARS-Cov-2 ijobiy deb aniqlanadi.
(2) Agar FAM kanali yoki VIC kanali ijobiy bo'lsa va boshqa kanal salbiy bo'lsa, testni takrorlash kerak. Agar u bir vaqtning o'zida ijobiy bo'lsa, u SARS-Cov-2 ijobiy deb baholanadi, aks holda SARS-Cov-2 salbiy deb baholanadi.
Tegishli mahsulotlar
-
COVID-19 IgM/IgG antikorlarini aniqlash to'plami
COVID-19 IgM/IgG antikorlarini aniqlash toʻplami （Kolloid oltin immunoxromatografiya usuli) Mahsulot qoʻllanmasi 【MAHSULOT NOMI】COVID-19 IgM/IgG antikorlarini aniqlash toʻplami (Kolloid oltin immunoxromatografiya usuli)【PACIFK1S testlari, SPECIFK1Ks bu 【 Xulosa】 Yangi koronaviruslar b turkumiga kiradi. COVID-19 oʻtkir respiratorli yuqumli kasallikdir. Odamlar odatda sezgir. Hozirgi vaqtda yangi koronavirus bilan kasallangan bemorlar asosiy manba hisoblanadi...
-
Nuklein kislotasi ekstraktsiyasi yoki tozalash to'plami
Nuklein kislotasi ekstraktsiyasi yoki tozalash to'plami yoki -20 ℃ da saqlanadi. Namuna 0 ℃ jingalak yordamida tashilishi kerak. Kirish Nuklein kislotani ekstraksiya qilish yoki tozalash to'plami (magnit boncuklar usuli) avtomatlashtirilgan nuklein kislota ekstraktsiyasi asboblari yordamida RNK va DNKni tana suyuqliklaridan (masalan, tamponlar, plazma, sarum) avtomatlashtirilgan tozalash uchun mo'ljallangan. Magnit-zarrachalar texnologiyasi yuqori sifatli DNK/RNKni ta'minlaydi, u ...
-
SARS-CoV-2 antigen tahlili to'plami (Immunoxromatogr...
SARS-CoV-2 antigen tahlili to'plami (Immunoxromatografiya usuli) Mahsulot qo'llanmasi 【MAHSULOT NOMI】SARS-CoV-2 antigen tahlili to'plami (Immunoxromatografiya usuli) 【QO'DAKLASH XUSUSIYATLARI】 1 ta test/to'plam korona virusiga tegishli emas. COVID-19 oʻtkir respiratorli yuqumli kasallikdir. Odamlar odatda sezgir. Ayni paytda yangi turdagi koronavirus bilan kasallangan bemorlar asosiy...
-
SARS-CoV-2 antigen tahlil to'plami
SARS-CoV-2 antigen tahlili toʻplami (Immunoxromatografiya usuli) Mahsulot qoʻllanmasi 【MAHSULOT NOMI】SARS-CoV-2 antigenini tahlil qilish toʻplami (Immunoxromatografiya usuli) 【QOʻDAKLASH XUSUSIYATLARI】 1 ta test/toʻplam, 25TRABTest, 】 The Yangi koronaviruslar b turkumiga kiradi. COVID-19 oʻtkir respiratorli yuqumli kasallikdir. Odamlar odatda sezgir. Hozirgi vaqtda yangi koronavirus bilan kasallangan bemorlar infektsiyaning asosiy manbai hisoblanadi; asemptomatik infektsiyalangan odamlar ...